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El factor de crecimiento de fibroblastos básico de ingeniería novedosa mejora la estabilidad y permite mejores resultados de cultivo celular

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El factor de crecimiento de fibroblastos básico de ingeniería novedosa mejora la estabilidad y permite mejores resultados de cultivo celular

El factor de crecimiento de fibroblastos básico bFGF, también conocido como FGF2 se usa ampliamente in vitro para el mantenimiento y la estimulación de una variedad de células. Sin embargo, el uso de bFGF nativo en biología celular está limitado por el hecho de que el bFGF se degrada rápidamente a nivel fisiológicotemperaturas; demostramos <20% de actividad de bFGF nativo después de 72 horas. Hemos abordado este problema con una forma de ingeniería de bFGF, llamada bFGF estable al calor HS bFGF, que es estable a 37 grados Celsius. HS bFGF mantiene> 90%homología con la proteína nativa y> 80% de actividad después de 72 horas en condiciones estándar de cultivo de mamíferos. Hemos utilizado HS bFGF para mejorar la expansión de células madre neurales NSC multipotentes de humanos y ratas, utilizando una concentración reducida de bFGF y unflujo de trabajo respectivamente. El tiempo de duplicación en ambos modelos también se redujo en aproximadamente un 30% con el uso de HS bFGF versus bFGF nativo. Críticamente, la diferenciación de NSC en los linajes neuronal, astrocitos y oligodendrocitos fue comparablele entre HS bFGF y bFGF nativo.La diferenciación aguas abajo demuestra la capacidad de HS bFGF para eliminarse completamente del cultivo cuando se desee.HS bFGF también se probó en la estimulación de células de adenocarcinoma de mama humano MCF7 en cultivo tridimensional 3D.Los esferoides de MCF7 se cultivaron en medio sin suero suplementado con bFGF durante 8 días sin cambios de medio de modo que la morfología del esferoide no se alterara.Los esferoides cultivados en HS bFGF eran perceptiblemente más grandes que los de bFGF nativo, comenzando solo tres días después de la siembra y continuando durante todo el período de cultivo.HS bFGF mejoró el crecimiento de esferoides en casi un 20% más que la proteína nativa, según lo medido por el ensayo PrestoBlue®.Debido a que no hubo necesidad de cambiar los medios, también pudimos observar cambios morfológicos en los esferoides que probablemente hubieran sido imposibles de documentar con un régimen estándar de cambio de medios.Estos datos refuerzan la idea de que el bFGF es un agente mitótico para las células MCF7, un punto que ha sido previamente debatido en la literatura, y confirman que el HS bFGF puede proporcionar una estimulación estable en cultivos a largo plazo.En conjunto, estos datos muestran que HS bFGF tiene una amplia aplicabilidad en biología celular y será una tecnología valiosa para una variedad de aplicaciones en el futuro.HS bFGF no solo permite el uso de concentraciones reducidas de bFGF, sino que también permite un flujo de trabajo más fácil de usar para el mantenimiento del cultivo celular.
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