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Multiplexación de ensayos basados ​​en células utilizando modelos de cultivo 3D

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Multiplexación de ensayos basados ​​en células utilizando modelos de cultivo 3D

La naturaleza física y el tamaño de los modelos de cultivo celular en 3D pueden ser muy diferentes a las de las células cultivadas como una monocapa sobre una superficie de plástico. La aplicación de reactivos de ensayo comerciales disponibles en el mercado que fueron originalmente diseñados para su uso con monocapas de células puede producir artefactos si no se completaLa lisis celular o la penetración incompleta del reactivo ocurre en las estructuras 3D más grandes. Esos problemas pueden amplificarse aún más cuando se intenta combinar multiplexar más de una química de ensayo para interrogar la misma muestra compuesta por estructuras de células 3D. Hemos diseñado formulaciones de ensayos de salud celular modificadasy protocolos para superar algunos de los problemas encontrados con el ensayo de modelos de cultivo 3D. También hemos probado la combinación / multiplexación de diferentes combinaciones de ensayo en las mismas muestras de esferoides individuales formados mediante el método de gota colgante. Hemos combinado un nuevo ensayo de viabilidad celular en tiempo real con: midiendo la muerte celular usando un tinte de unión al ADN, midiendo la actividad del reportero de luciferasa de luciérnaga para detect eventos de estrés celular y extracción de ARN para realizar análisis de expresión génica.Se describirán los parámetros necesarios para validar cada combinación de ensayo múltiple y las ventajas y desventajas de cada método.
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