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Prueba COVID-19 sensible y rápida desarrollada

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Prueba COVID-19 sensible y rápida desarrollada

Crédito: Pixabay
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Investigadores de la Universidad de Birmingham, Reino Unido, han confirmado la velocidad, precisión y simplicidad de un método de prueba novedoso y altamente sensible para COVID-19 que se puede implementar en lugares de entretenimiento, terminales de llegadas de aeropuertos y en entornos remotos donde se realizan pruebas clínicaslaboratorios no están disponibles.

Los científicos utilizaron un estudio de comparación de tres vías para confirmar que el método de reacción de amplificación exponencial EXPAR es tan sensible, pero más rápido, que las pruebas de PCR y LAMP que se utilizan actualmente en entornos hospitalarios. La prueba COVID-19 de Birmingham,llamado RTF-EXPAR, proporciona un tiempo de muestra a señal de menos de 10 minutos, incluso para niveles virales bajos donde las pruebas de flujo lateral actuales son menos efectivas.

Los profesores Tim Dafforn de la Facultad de Biociencias y Jim Tucker de la Facultad de Química trabajaron con el estudiante graduado Jake Carter y el profesor Andrew Beggs del Instituto de Cáncer y Ciencias Genómicas en el estudio, que fue publicado en PNAS .

Las pruebas de PCR y LAMP detectan ARN viral, que puede estar presente en niveles extremadamente bajos en hisopos tomados de la boca y la nariz. Estas pruebas utilizan un proceso de dos pasos que implica primero la conversión de ARN a ADN un proceso llamado transcripción inversa y luego 'amplificando' el material muchas veces para que pueda ser detectado en la muestra.

El profesor Tim Dafforn dijo: “Tanto los pasos de transcripción inversa como de amplificación ralentizan los ensayos COVID existentes que se basan en la detección de ácidos nucleicos, en comparación con las pruebas de antígenos, como el flujo lateral, que no tienen estos pasos.Las pruebas de flujo lateral más rápidas que las basadas en PCR y LAMP, a cambio, suelen ser menos sensibles. Una prueba ideal sería una que sea lo suficientemente sensible y rápida; nuestra prueba, llamada RTF-EXPAR, logra este objetivo.

RTF-EXPAR logra esta hazaña de dos maneras: en primer lugar, el equipo de ensayo diseñó un nuevo paso de conversión de ARN a ADN que evita la transcripción inversa, haciéndolo libre de transcripción inversa RTF. En segundo lugar, su paso de amplificación para generar la lecturala señal utiliza EXPAR, un proceso de amplificación de ADN alternativo a la PCR y LAMP.

El profesor Dafforn agregó: "EXPAR amplifica el ADN a una sola temperatura, evitando así los largos pasos de calentamiento y enfriamiento que se encuentran en la PCR. Sin embargo, mientras que LAMP también usa una sola temperatura para la amplificación, EXPAR es un proceso más simple y directo, en el quese amplifican hebras mucho más pequeñas. Esto hace que EXPAR sea una técnica de amplificación de ADN aún más rápida que no solo la PCR sino también la LAMP ”.

El estudio reveló que el método RTF-EXPAR convierte menos de 10 hebras de ARN en miles de millones de copias de ADN en menos de 10 minutos, utilizando un ensayo de un solo recipiente que es compatible con equipos de sobremesa más básicos que los que se usan con los métodos de prueba actuales..

RTF-EXPAR también demostró mejoras significativas con respecto a los ensayos basados ​​en PCR y LAMP en el tiempo de detección de la señal. A bajas concentraciones de ARN 7,25 copias / µL, el tiempo de detección de la señal fue de 42,67 ± 0,47 minutos para la PCR,11,25 ± 0,20 minutos para LAMP y 8,75 ± 0,35 minutos para EXPAR. A concentraciones altas 1450 copias / µL de ARN viral, el tiempo de detección de la señal fue de 34,00 ± 0,00 minutos para PCR, 11,25 ±0,20 minutos para LAMP y 3,08 ± 0,42 minutos para EXPAR.

La identificación de la secuencia óptima fue claramente un paso importante en el desarrollo del método EXPAR, y se ha demostrado que la secuencia detectada en el estudio, que proviene del gen Orf1ab en el genoma del SARS-CoV-2, se conserva entodas las variantes actuales de COVID. Sin embargo, el método RTF-EXPAR se puede adaptar rápidamente en caso de que surjan nuevas variantes o para probar otros patógenos virales como la influenza, el virus respiratorio sincitial RSV o el ébola, donde se requieren pruebas cercanas al paciente paraprevenir una transmisión más generalizada.

El ensayo se probó en el Laboratorio de Investigación Quirúrgica de la Universidad de Birmingham. El profesor Andrew Beggs, cuyo equipo realizó la prueba, comentó: “La prueba utilizó hisopos que contenían un rango típico de cargas virales observadas durante la pandemia, y tenían untiempo de corte de seis minutos. El análisis mostró que la sensibilidad de RTF-EXPAR es equivalente a la prueba de PCR cuantitativa, con un valor predictivo positivo del 89% y un valor predictivo negativo del 93%. Esperamos publicar los resultados completos de esta pruebaen el futuro cercano."

El equipo ahora está buscando socios comerciales para obtener licencias rápidas, para que la prueba RTF-EXPAR esté lo más disponible posible.

Referencia : Carter JG, Orueta Iturbe L, Duprey J-LHA, et al. Detección ultrarrápida del ARN del SARS-CoV-2 mediante una reacción de amplificación exponencial sin transcripción inversa, RTF-EXPAR. Proc Natl Acad Sci EE. UU. . 2021; 118 35: e2100347118. Doi: 10.1073 / pnas.2100347118

Este artículo se ha vuelto a publicar a partir de lo siguiente materiales . Nota: el material puede haber sido editado por su extensión y contenido. Para obtener más información, comuníquese con la fuente citada.

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